Zato moramo za dejansko ovrednotenje vpliva super-ojačevalcev upoštevati tudi rezultate o številu kopij ekspresijskega vektorja, ki so vstavljene v genom.

Zaradi konstrukcije ekspresijskega vektorja se hkrati amplificira tudi tarčni gen, s čimer povečamo produktivnost celične linije.

Zanimalo nas je, ali integracija mAb ekspresijskega vektorja v bližino odprtih regij poveča produktivnost celic.

Za želeno efektorsko funkcijo protiteles ključna pravilna glikozilacija je odvisna od uporabljenega ekspresijskega sistema in pogojev gojenja.

Za uspešno izražanje proteina je pomembna izbira ekspresijskega vektorja, gostiteljskega organizma in ustrezni pogoji za biosintezo tarčnih proteinov.

Za ta namen je bilo najprej potrebno pripraviti rekombinantne proteine, kar nam je uspelo s pomočjo bakterijskega ekspresijskega sistema.

Za prvo standardno krivuljo smo uporabili redčine standarda (ekspresijskega vektorja, s katerim smo transficirali celice).

Z elektroforezo na agaroznem gelu smo preverili uspešnost rezanja ekspresijskega vektorja z restrikcijskimi endonukleazami.

Vnos ekspresijskega vektorja v genom celice imenujemo transfekcija.

Večjo produktivnost bi morda lahko dosegli z integracijo mAb ekspresijskega plazmida direktno v odprte regije genoma.

V primeru pomnoževanja mAb ekspresijskega plazmida dobimo šibek, nespecifičen signal.

V prihodnje bomo razmislili o zamenjavi ekspresijskega sistema, da bi tako zagotovili tudi ustrezno glikozilacijo produkta in s tem njegovo večjo stabilnost.

Uspešen kristalizacijski proces se začenja pri izbiri ustreznega ekspresijskega sistema in nastanka rekombinantnega proteina z visokim nivojem izražanja, topnosti, kristalizabilnosti itd.

Tako pridobljene informacije so nam, med drugimi, služile za lažje načrtovanje nadaljnjih postopkov (npr. ustrezen izbor ekspresijskega seva).

Tako na poliakrilamidnem gelu ne bi zaznali razlike med neinducirano in inducirano kulturo ekspresijskega klona.

Ta sodeč po protokolu za uporabo tega ekspresijskega sistema zmanjša uspešnost cepitve proteina z nosilca.

Prvi korak v razvoju produkcijske celične linije je vnos ekspresijskega vektorja v izbrani ekspresijski sistem.

Produkcija rekombinantnih proteinov temelji na stabilni integraciji ekspresijskega vektorja v genom gostitelja.

Pridobili smo ga s pomočjo bakterijskega ekspresijskega sistema, ga izolirali in očistili z gelsko, ionsko - izmenjevalno in afinitetno kromatografijo.

Posledično lahko celice brez ekspresijskega vektorja slednje hitro prerastejo.