Pričakujemo tudi, da bomo v teh astrocitih, s superresolucijsko mikroskopijo s strukturirano osvetlitvijo, pokazali pojavljanje večjih, MHCII-imunopozitivnih mešičkov v citoplazmi.

Zmožnost (aktiviranih) astrocitov za izločanja eksosomov z molekulami MHCII je tako lahko potencialno obetavna pot nadaljnjih raziskav.

Vsi naši rezultati tako potrjujejo, da se molekule MHCII v astrocitih pretežno lokalizirajo v pozne endo-/lizosome.

Modulacija procesov endocitoze igra ključno vlogo v uravnavanju dinamike površinsko prisotnih molekul MHCII in njihove premene.

Nato smo nadaljevali z imunocitokemičnim označevanjem (zgolj proti MHCII) po opisanem postopku.

V kontrolnih astrocitih smo opazili le majhno število MHCII-imunopozitivnih mešičkov (37 ± 4 mešičkov na celico).

Celokupna nadpražna imunofluorescenca MHCII v vidnem polju je normalizirana na število celic, ki smo ga določili s štetjem jeder obarvanih z DAPI.

Na ta način je omogočena dolgotrajnejša izpostavljenost molekul MHCII na površini astrocitov, kar potencialno poveča verjetnost predstavitve antigenov limfocitom T pomagalkam.

IFNγ nadalje inducira ekspresijo molekul MHCII tudi v številnih drugih vrstah celic, ki v fizioloških pogojih ne predstavljajo antigenov z MHCII.

Po sintezi in zvitju se na kompleks MHCII v ER veže invariantna veriga, ki prekriva vezavno mesto za molekule antigena.

Molekule MHCII se dostavijo na plazmalemo astrocitov z eksocitozo lizosomov.

Celice smo barvali s protitelesi proti kompleksu MHCII (polne črte).

Imunofluorescenčno označen MHCII se je porazdelil v podobi zrnatih struktur v citoplazmi; ta vzorec je indikativen za porazdeljenost v mešičke (Slike 1-5).

Izražanje molekul MHCII smo potrdili imunocitokemično, tako v serumskih kot v zvezdastih astrocitih, v katerih je bilo manj izrazito (Slika 2).

Naša raziskava je poglobila razumevanje temeljnega celično-biološkega procesa z IFNγ induciranega izražanja in transporta molekul MHCII v astrocitih.

Astrocite smo dvojno fluorescenčno označili; rdeča fluorescenca prikazuje imunofluorescenco MHCII, medtem ko modra fluorescenca prikazuje jedra označena z DAPI.

Črne točkaste sledi v mikrografijah prikazujejo posamezne MHCII-imunopozitivne mešičke, ki jih sestavljajo ≥3 stikajoči piksli z nadpražno imunofluorescenco MHCII.

Tretiranje z IFNγ je povzročilo povečanje imunofluorescence MHCII, ki je bila porazdeljena v značilnem vzorcu s podobo mešičkov.

Tretiranje astrocitov z IFNγ inducira izražanje molekul MHCII, ki je bolj izrazito v astrocitih, gojenih v serumskem gojišču.

Mešički, ki vsebujejo molekule MHCII so večji in številnejši v neposredni bližini plazmaleme serumskih astrocitov, tretiranih z IFNγ.