Žive celice z aktivnim metabolizmom neprekinjeno pretvarjajo resazurin v resofurin, kar vodi v povečevanje fluorescence resorufina in spreminjanje obarvanosti celičnega gojišča.

Žive celice ga ireverzibilno reducirajo do roza resorufina in se lahko reverzibilno razbarva.

Vseeno smo si z rezultati fluorescence resorufina pomagali pri odločitvi končnih pogojev metode.

V ta namen smo z uporabo različnih koncentracij resorufina pripravili standardno krivuljo odvisnosti fluorescence od koncentracije resorufina.

V citosolu celic poteče redukcija resazurina do rožnato obarvanega resorufina, ki močno fluorescira.

Tokrat smo pomerili fluorescenco resorufina, izmerjenim posameznim vrednostim smo odšteli posamezne vrednosti meritve ozadja.

Test temelji na znotrajcelični redukciji resazurina do resorufina, redukcijo pa so zmožne izvajati viabilne in metabolično aktivne celice.

Tako resazurin kot tudi resorufin prehajata celično membrano, zato za merjenje fluorescence nastalega resorufina liza celic ni potrebna.

Rezultati pri merjenju fluorescence resorufina so bili tudi variabilni in smo zato njegovo uporabo med optimizacijo metode opustili.

Rezultat te reakcije je nastanek resorufina, ki je rdeče obarvan fluorescentni produkt.

Resazurin lahko prehaja skozi celično membrano do mitohondrijev, kjer se pod vplivom reduktaz reducira do resorufina, ki fluorescira rožnato.

Reagent vsebuje modro barvilo resazurin, ki se po vstopu v viabilne celice reducira do fluorescirajočega resorufina, ki je rdeče barve.

RA smo določili s pomočjo standardne krivulje, ki prikazuje odvisnost fluorescence od koncentracije resorufina.

Pri vstopu resazurina v notranjost živih celic, se le-ta zaradi njihove presnovne aktivnosti reducira do resorufina, ki je rdeče obarvan.

Pri resazurinskem testu smo celicam dodali kemikalijo resazurin, ki jo viabilne celice reducirajo do resorufina.

Predvidevamo, da je to posledica 'gašenja fluorescence' (auto quenchinga) pri večjih koncentracijah resorufina.

Nastala spojina po redukciji resorufina izkazuje fluorescenco rožnate barve.

Količina nastalega resorufina je tako premo sorazmerna količini metabolno aktivnih celic in viabilnosti.

Izmerjena intenziteta fluorescence resorufina je odvisna od koncentracije radikala.

Določali smo jo s pomočjo fluorescenčnega redoks indikatorja celične viabilnosti resazurina, ki se ob izpostavljenosti metabolno aktivnim celicam reducira do fluorescenčnega resorufina.