Značilnost dPCR je zmožnost zaznavanja redkih tarč zaradi porazdelitve vzorca v particije, ki obogatijo tarčne molekule glede na ozadje (netarčne molekule).

Za vzpostavitev in optimizacijo dPCR metode smo uporabili metodo qPCR, saj je široko uveljavljena tehnika za detekcijo mutacij na nivoju posameznih nukleotidov.

Za metodo dPCR smo se odločili, ker omogoča visoko občutljivost, absolutno kvantifikacijo in detekcijo redkih mutacij z visoko natančnostjo.

Z uporabo večtarčnih dPCR pristopov lahko dovolj dobro ovrednotimo integriteto nukleinskih kislin.

Z rdečo sta označeni mutaciji, ki sta bili po začetni analizi s castPCR izbrani za nadaljnjo analizo z dPCR.

Z metodo dPCR se lahko hitro prepozna odpornost gliv na triazol in uporabi drug fungicid za zatiranje.

Z dPCR sicer ne izvemo podrobne porazdelitve, temveč le ali so tarčne molekule prisotne v particiji ali ne.

Vzporedno smo testirali dva sistema dPCR - kapljičnega in kamričnega ter ju primerjali.

Več raziskav je dokazalo, da inhibitorji na dPCR vplivajo v manjši meri kot na qPCR.

V onkologiji se trenutno dPCR uporablja za detekcijo molekul, ki izvirajo iz vzorcev tumorskega tkiva.

V okviru magistrske naloge smo testirali in optimizirali večtarčni dPCR pristop kot metodo za kvantifikacijo in oceno integritete nukleinskih kislin.

V nadaljevanju smo te genetsko preurejene vzorce uporabili za namen vzpostavitve odkrivanja mutacij z metodama qPCR in dPCR.

Uvedli smo tri hkratne dPCR reakcije (angl. multiplex dPCR reaction).

Trenutno obstajata dva pristopa za izvedbo dPCR: kamrični (angl. chamber (chip)-based methods) in kapljični (angl. droplet-based methods).

To nakazuje na to, da je v primerjavi s qPCR dPCR odpornejša proti inhibitorjem, prisotnim v vzorcu .

Splošno smo dodatno potrdili primernost dPCR za nadaljnjo primerjavo kvantifikacijskih pristopov.

Slika prikazuje primerjavo dvojih izmerjenih rezultatov z dPCR.

Rezultati integritete pridobljeni z različnimi tipi dPCR (kapljična ali kamrična) so primerljivi.

Restrikcijski encim smo dodali v reakcijsko mešanico skupaj z ostalimi komponentami reakcije dPCR.

Pri dPCR uporabljamo enake parametre kemije in cikličnega pomnoževanja kot pri qPCR.