To hipotezo smo preverili s pomočjo in vitro retrotranspozicijskega testa v celičnih kulturah in analizo na novo integriranih kopij retrotranspozona v genomu.

Povedano drugače : pri majhni aktivnosti retrotranspozona že majhno povečanje količine inhibitorja doprinese relativno velik delež k skupnemu deležu inhibicije in obratno .

Manjša kot je stopnja retrotranspozicije nekega retrotranspozona , večji je učinek inhibicije , ki ga neko povečanje količine proteina povzroči .

Zanemarljivo majhen učinek na stopnjo retrotranspozicije retrotranspozona hL1 smo sicer opazili pri proteinu zfA2a.

Pri ugotavljanju hitrosti retrotranspozicije v prisotnosti proteina A3 smo uporabili retrotranspozona , ki sta označena z genom za neomicinsko rezistenco ( gen neo ) .

Zaradi prisotnosti retrotranspozona je bil blokiran gen v CF genotipih in odsotnost represorja je sprožila kontinuirano cvetenje.

Ali retrotranspozicijo preprečujejo z deaminacijo v nukleotidnem zaporedju retrotranspozona, smo preučevali s sekvenciranjem novih kopij retrotranspozonske DNA v izolirani celični DNA.

Slika 30 : Prikaz stopnje retrotranspozicije posameznega retrotranspozona ob prisotnosti posameznih točkovnih mutant proteinov APOBEC glede na retrotranspozicijo pri kotransfekciji s praznim vektorjem pcDNA6 .

Slika 27 : Prikaz stopnje retrotranspozicije posameznega retrotranspozona ob prisotnosti posameznih proteinov APOBEC glede na retrotranspozicijo pri kotransfekciji s praznim vektorjem pcDNA6 .

Vir promotorskih zaporedij retrogenov so lahko tudi zaporedja TE, ki nosijo (proto)promotorska zaporedja, vstavljena pred zaporedjem retrotranspozona (Fablet in sod., 2009).

Slednje v večini pripadajo razlikam v vsebnosti retrotranspozona Ty.

Naši rezultati nakazujejo, da proteini A1 ne inhibirajo retrotranspozicije elementa hL1 preko zmanjšanja relativnega števila novih kopij DNA retrotranspozona hL1.

Hitrost retrotranspozicije smo primerjali v celicah HeLa z uporabo označenega retrotranspozona v prisotnosti posameznih proteinov APOBEC .

Podobne rezultate smo dobili tudi pri inhibiciji retrotranspozicije retrotranspozona ZfL2 , katerega zapis je vseboval plazmid BZ-25 .

Novonastala kopija DNA retrotranspozona se prenese v jedro, kjer jo integraza vstavi v genom (Havecker in sod., 2004).

Konec 3'-UTR retrotranspozona sicer veže reverzna transkriptaza proteina ORF2p in tam začne reverzno transkripcijo.

To smo dokazali s sekvenciranjem novih kopij retrotranspozona L2 in testiranjem encimskih mutant proteinov A3.

V okviru magistrske naloge smo želeli preveriti jedrni prenos proteina ORF1p iz retrotranspozona LINE1.

Z metodo qPCR smo ugotovili, da mehanizem inhibicije retrotranspozona L2 s proteini A3 vključuje zniževanje relativnega števila novih kopij retrotranspozonske DNA.

S štetjem obarvanih celic smo ugotovili kateri proteini A3 najbolj inhibirajo retrotranspozicijo ZfL2 retrotranspozona .